O rendimento quântico de fluorescência é a razão entre o número de fotões emitidos pela amostra como fluorescência e o número de fotões da luz de excitação absorvidos.
Conhecem-se dois métodos de medição o método Absoluto e o método Relativo.
Método relativo
O método relativo consiste em comparar a intensidade da fluorescência de um padrão com a da amostra desconhecida para calcular o rendimento quântico da amostra desconhecida. Desta forma, os resultados obtidos dependem da exatidão do valor do rendimento quântico da amostra e de padrão.
Método absoluto
O rendimento quântico também pode ser obtido diretamente pelo método absoluto, uma vez que o método absoluto permite detetar toda a fluorescência da amostra e integra-a utilizando uma esfera integradora, permitindo uma medição mais precisa do rendimento quântico.
Método de medição
- Medição da luz incidente – Colocar a célula com solvente no suporte da célula de amostragem na esfera integradora e medir o espetro da luz incidente (no caso de uma amostra sólida, não colocar nada no suporte da célula de amostra na esfera integradora e medir o espetro da luz incidente). A área do pico obtida é definida como a área da luz incidente, S0 (número equivalente de fotões na luz incidente).
- Medição da amostra – Colocar a amostra no suporte de amostras e medir os espectros de dispersão e de fluorescência da amostra. A área do pico de comprimento de onda de excitação obtida é definida como a área de dispersão da amostra, S1 (número equivalente de fotões que não foram absorvidos), e a área do pico na gama de comprimentos de onda de emissão é definida como a área emitida pela amostra, S2.
Cálculo do rendimento quântico – Calcular de acordo com a seguinte fórmula
- Absorção da amostra (%) = (S0 – S1)/S0 × 100
- Rendimento quântico externo (%) = S2/S0 × 100
- Rendimento quântico interno (%) = S2/(S0 – S1) × 100
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